Estudos estruturais e bioquímicos de 10 enzimas com possível atividade de PET hidrolase oriundas de metagenoma antártico (2023)
- Authors:
- Autor USP: FURTADO, ADRIANO ALVES - IFSC
- Unidade: IFSC
- Sigla do Departamento: FCI
- DOI: 10.11606/D.76.2023.tde-06102023-114452
- Subjects: CRISTALOGRAFIA; DIFRAÇÃO POR RAIOS X; ENZIMAS HIDROLÍTICAS; BIOQUÍMICA
- Keywords: CBM (Carbohydrate-binding module); Crystallography; PET (Polyethylene Terephthalate); PETase; X-ray Diffraction
- Language: Português
- Abstract: Até o momento, os plásticos têm sido os produtos com maior acúmulo nos últimos anos e sua fragmentação tem sido um dos maiores poluentes. O polietileno tereftalato (PET) é um dos materiais mais utilizados na fabricação de garrafas descartáveis e tem sido o foco estratégico para decomposição e mitigação da poluição. No entanto, os processos desenvolvidos até agora têm sido ineficientes. Com a descoberta de enzimas que degradam o PET, surge a oportunidade de aplicação biotecnológica para minimizar esses problemas. Neste trabalho, estudamos 11 enzimas recombinantes da Antártica (e uma variação) com potencial atividade catalítica contra o PET, identificadas por metagenômica. Os parâmetros de expressão proteica foram otimizados em diferentes cepas de Escherichia coli e as purificações foram realizadas em duas ou três etapas (Cromatografia de Afinidade, Troca Iônica e Exclusão Molecular) com algumas adaptações. A partir das purificações, isolamos 10 proteínas . Os ensaios de cristalização levaram a cristais para 8 enzimas, das quais obtivemos 4 estruturas cristalográficas resolvidas entre 2,32 Å e 1,2 Å. Análises estruturais das estruturas resolvidas por difração de raios-X e estruturas teóricas geradas pelo AlphaFold2 foram realizadas por meio de docking molecular entre as enzimas e um fragmento de PET. Essas análises revelaram mudanças sequenciais e estruturais críticas. Com a intenção de acumular um maior conhecimento sobre PETase, que poderia ser empregada namelhoria das enzimas para fins biotecnológicos, experimentos biofísicos e bioquímicos foram realizados, onde observamos comportamentos distintos tanto para a estabilidade térmica quanto para atividade
- Imprenta:
- Publisher place: São Carlos
- Date published: 2023
- Data da defesa: 04.08.2023
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- Este artigo é de acesso aberto
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- Cor do Acesso Aberto: gold
- Licença: cc-by-nc-sa
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ABNT
FURTADO, Adriano Alves. Estudos estruturais e bioquímicos de 10 enzimas com possível atividade de PET hidrolase oriundas de metagenoma antártico. 2023. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, São Carlos, 2023. Disponível em: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76133/tde-06102023-114452/. Acesso em: 05 jun. 2024. -
APA
Furtado, A. A. (2023). Estudos estruturais e bioquímicos de 10 enzimas com possível atividade de PET hidrolase oriundas de metagenoma antártico (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, São Carlos. Recuperado de https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76133/tde-06102023-114452/ -
NLM
Furtado AA. Estudos estruturais e bioquímicos de 10 enzimas com possível atividade de PET hidrolase oriundas de metagenoma antártico [Internet]. 2023 ;[citado 2024 jun. 05 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76133/tde-06102023-114452/ -
Vancouver
Furtado AA. Estudos estruturais e bioquímicos de 10 enzimas com possível atividade de PET hidrolase oriundas de metagenoma antártico [Internet]. 2023 ;[citado 2024 jun. 05 ] Available from: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/76/76133/tde-06102023-114452/
Informações sobre o DOI: 10.11606/D.76.2023.tde-06102023-114452 (Fonte: oaDOI API)
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