Padronização da espectrometria de massa MALDI-TOF para identificação de cepas de Trichosporon spp. de importância médica (2014)
- Authors:
- Autor USP: ALMEIDA JúNIOR, JOãO NOBREGA DE - FM
- Unidade: FM
- Sigla do Departamento: MPT
- Subjects: ESPECTROMETRIA DE MASSAS; MICOSES (DIAGNÓSTICO); MEDICINA (HISTÓRIA); MICOLOGIA MÉDICA; FILOGENIA
- Keywords: Espectrometria de massas por ionização e dessorção; Micoses/diagnóstico; Molecular typing; Mycosis/diagnosis; Proteômica; Proteomics; Spectrometry mass matrix-assisted laser desorption-ionisation; Tipagem molecular; Trichosporon spp; Trichosporon spp
- Language: Português
- Abstract: O gênero Trichosporon é composto por leveduras artrosporadas do Filo Basidiomycota e é conhecido agente de infecção fúngica invasiva (IFI) em pacientes imunodeprimidos ou com outros fatores de risco. Em pacientes onco-hematológicos é a principal levedura responsável por IFI depois do gênero Candida. Entre as espécies responsáveis por infecções no homem encontram-se: T. asahii, T. inkin, T. mucoides, T. dermatis, T. jirovecii, T. ovoides, T. cutaneum, T. montevideense, T. domesticum, T. asteroides, T. coremiiforme, T. faecale, T. dohaense, T. lactis, T. japonicum. A tecnologia de identificação de fungos por espectrometria de massa (SM) MALDI-TOF ainda carece de padronização para identificação de fungos do gênero Trichosporon, mas a literatura mostra resultados encorajadores. O objetivo deste estudo é padronizar a técnica de espectrometria de massa MALDI-TOF para a identificação das espécies do gênero Trichosporon de importância médica. O estudo foi realizado em cooperação entre a Divisão de Laboratório Central do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (DLC, HC-FMUSP), Instituto de Medicina Tropical da USP (IMT-USP), Instituto Adolfo Lutz (IAL) e Laboratoire de Parasitologie-Mycologie do Hospital Saint Antoine de Paris, vinculado ao grupo de pesquisa INSERM/UPMC UMR S945 "Immunité et Infection" Faculté de Medecine et Université Pierre et Marie Curie de Paris.Noventa e três cepas/isolados foram analisado(a)s, sendo dezenove cepas de referência adquiridas junto à coleção holandesa Centraalbureau Schimmelcultures (CBS), 19 isolados do HC-FMUSP e IAL, e 55 isolados de diferentes hospitais franceses. A identificação molecular foi realizada através do sequenciamento da região IGS1 do rDNA e foi considerada como método de referência. O protocolo de extração de proteínas foi estabelecido através da comparação do desempenho de três metodologias (Bruker®, Cassagne et al., Sendid et al.). Os espectros de massa foram obtidos no laboratório de bacteriologia do Hospital Saint Antoine de Paris através do aparelho Microflex LT®. A interpretação dos resultados qualitativos e quantitativos (logscore) foi realizada através do Software Biotyper 3.0®. O desempenho de identificação do banco de espectros de referência Biotyper 3.0® foi comparado a outros cinco bancos criados a partir de espectros de referência (ERs) derivados de 18 cepas de referência CBS, sete isolados clínicos e 11 ERs do banco Biotyper 3.0. O protocolo de extração de proteínas descrito por Sendid et al. foi escolhido como protocolo de referência pois os espectros produzidos tiveram logscore superiores àqueles obtidos através do método do fabricante. O banco de ERs Biotyper 3.0® apresentou 32,3% de identificações corretas das espécies, sendo que o banco de ERs in house (número 5, constituído cepas CBS e isolados clínicos) apresentou 98,5% de identificações de espécies.Espectros de referência do banco de dados Biotyper 3.0® foram submetidos à identificação com a utilização dos ERs criados a partir de cepas CBS e isolados clínicos e foram evidenciados com erros de identificação: T. mucoides (2), T. ovoides (1) e T. cutaneum (2). Após padronização do protocolo de extração e criação de banco de ERs com cepas CBS e isolados clínicos caracterizados pelo sequenciamento da região IGS, a SM por MALDI-TOF apresentou-se como potente uma ferramenta para a identificação de fungos do gênero Trichosporon. O banco de ERs Biotyper 3.0® apresentou um fraco desempenho, relacionado a ERs que foram criados a partir de cepas mal identificadas
- Imprenta:
- Data da defesa: 01.04.2014
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ABNT
ALMEIDA JÚNIOR, João Nobrega de. Padronização da espectrometria de massa MALDI-TOF para identificação de cepas de Trichosporon spp. de importância médica. 2014. Tese (Doutorado) – Universidade de São Paulo, São Paulo, 2014. Disponível em: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-05052014-110905/. Acesso em: 04 jun. 2024. -
APA
Almeida Júnior, J. N. de. (2014). Padronização da espectrometria de massa MALDI-TOF para identificação de cepas de Trichosporon spp. de importância médica (Tese (Doutorado). Universidade de São Paulo, São Paulo. Recuperado de http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-05052014-110905/ -
NLM
Almeida Júnior JN de. Padronização da espectrometria de massa MALDI-TOF para identificação de cepas de Trichosporon spp. de importância médica [Internet]. 2014 ;[citado 2024 jun. 04 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-05052014-110905/ -
Vancouver
Almeida Júnior JN de. Padronização da espectrometria de massa MALDI-TOF para identificação de cepas de Trichosporon spp. de importância médica [Internet]. 2014 ;[citado 2024 jun. 04 ] Available from: http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/5/5144/tde-05052014-110905/
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