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Tese

Caracterização molecular e funcional dos genes de expressão restrita a melanoma, RMELs 1, 2 e 3, desvendados aqui como novos alvos transcricionais das vias de MAPK e PI3K (2013)

  • Authors:
  • Autor USP: CARDOSO, CIBELE - FMRP
  • Unidade: FMRP
  • Sigla do Departamento: RBP
  • Subjects: NEOPLASIAS; BIOMARCADORES; GENES
  • Language: Português
  • Abstract: Melanoma é um tumor altamente agressivo devido a sua elevada capacidade metastática e resistência terapêutica. O sequenciamento em larga escala mostrou que mais de 50% dos melanomas estão associados a uma mutação oncogênica no gene BRAF, o qual codifica a proteína serina-treonina quinase, iniciadora da cascata de MAPK. A mutação, que causa a troca do resíduo aminoácido de valina da posição 600 por um ácido glutâmico (V600E), torna a quinase independente de Ras e constitutivamente ativa. A descoberta deu lugar ao desenvolvimento de uma droga ATP-mimética (PLX4032, Vemurafenib) com alta especificidade contra a quinase mutante, capaz de excelente resposta terapêutica contra o melanoma. No entanto a remissão é temporária e o câncer recidiva em torno de 6 meses depois. Sendo assim, a identificação de novos genes envolvidos na malignidade do melanoma continua sendo essencial, com especial enfoque a se desvendar mecanismos da resistência terapêutica ao inibidor de BRAF. Sousa and Torrieri et al. (PLOS ONE, 5:1-13, 2010), em trabalho realizado em nosso laboratório, identificaram um grupo de genes com expressão restrita a melanoma, entre eles três genes não anotados, nomeados RMELs 1, 2 e 3, que mapeiam nos cromossomos 2q12.2, 1q25.3, e 5q11.2, respectivamente, e que além de restritos a melanoma, também mostraram expressão correlacionada à presença da mutação oncogênica ‘BRAF POT. V600E’. Com base nesta evidência, os objetivos centrais do presente trabalho foram verificar a influência do oncogene BRAF na regulação da expressão gênica dos RMELs e a relevância funcional destes genes no crescimento e sobrevivência celular. Verificou-se que a inibição da cascata de MAPK com o inibidor do oncogene BRAF PLX4032, assim como a inibição de MEK1 com o inibidor PD98059, em linhagens de melanoma carregando a mutação V600E ocasionou redução significativa nos níveis de mRNAs dos genes RMELs.Com base nestes resultados, avaliamos se estes genes também seriam alvos da via de PI3K (phosphoinositideo-3-kinase), uma via alternativa de sobrevivência/proliferação celular comumente ativada em melanoma. Para esta análise utilizamos o inibidor LY294002 que age diretamente na proteína PI3K. Observamos alteração nos níveis de mRNAs dos genes em estudo, embora em graus variáveis. Adicionalmente, avaliamos os efeitos da depleção, mediada por siRNAs, dos RNAs dos RMELs na capacidade proliferativa e de sobrevivência celular. Na depleção do RMEL1, foi observado um aumento significativo na capacidade clonogênica, mas nenhum efeito na proliferação celular, entretanto para o gene RMEL3 foi demonstrada uma redução na capacidade clonogênica assim como na taxa proliferativa e nenhum efeito foi observado com a depleção do RMEL2. Os resultados obtidas demonstraram que os novos genes RMELs são potenciais alvos transcricionais das vias de MAPK e PI3K, sugerindo também o envolvimento dos genes RMEL1 e 3 no crescimento celular e/ou sobrevivência. Além disso, tivemos como objetivo construir ferramentas para forçar a expressão dos genes em linhagens celulares com baixa expressão. Com base nas sequências de mRNA mais extensas, amplificamos por RT-PCR e clonamos os cDNAs para os genes RMEL1 e RMEL3. O cDNA correspondente a sequência completa do RMEL3 foi subclonado em um vetor lentiviral sob promotor regulado por tetraciclina (doxiciclina). Células de melanoma transduzidas foram selecionadas e apresentaram um aumento de duas vezes nos níveis de expressão para este gene quando sob indução com doxiciclina. Estas células apresentam aumento da capacidade proliferativa embora não se tenha detectado em ensaios preliminares alteração na sensibilidade às drogas inibidoras de quinases da via de MAPK e PI3K. Finalmente, temos como objetivo verificar se a expressão dos RMELs se altera em células de melanomaselecionadas como resistentes às drogas inibidoras de quinases, após tratamento prolongado. Estas análises podem responder se estes genes estariam envolvidos na resistência terapêutica desenvolvida após tratamento prolongado. Alterações na expressão de fatores pró-apoptóticos envolvendo controle pós-transcriocional por RNAs regulatórios vem sendo recentemente descritas
  • Imprenta:
  • Data da defesa: 01.03.2013
    • How to cite
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    • ABNT

      CARDOSO, Cibele. Caracterização molecular e funcional dos genes de expressão restrita a melanoma, RMELs 1, 2 e 3, desvendados aqui como novos alvos transcricionais das vias de MAPK e PI3K. 2013. Dissertação (Mestrado) – Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto, 2013. . Acesso em: 02 jun. 2024.

    • APA

      Cardoso, C. (2013). Caracterização molecular e funcional dos genes de expressão restrita a melanoma, RMELs 1, 2 e 3, desvendados aqui como novos alvos transcricionais das vias de MAPK e PI3K (Dissertação (Mestrado). Universidade de São Paulo, Ribeirão Preto.

    • NLM

      Cardoso C. Caracterização molecular e funcional dos genes de expressão restrita a melanoma, RMELs 1, 2 e 3, desvendados aqui como novos alvos transcricionais das vias de MAPK e PI3K. 2013 ;[citado 2024 jun. 02 ]

    • Vancouver

      Cardoso C. Caracterização molecular e funcional dos genes de expressão restrita a melanoma, RMELs 1, 2 e 3, desvendados aqui como novos alvos transcricionais das vias de MAPK e PI3K. 2013 ;[citado 2024 jun. 02 ]

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